Proteomanalysen zur Aufklärung regulatorischer Prozesse im Zentralstoffwechsel der humanen Produktionszelllinie AGE1.HN

Bielefelder Schriften zur Zellkulturtechnik, Bd. 11

Eva Skerhutt

ISBN 978-3-8325-3653-4
198 pages, year of publication: 2014
price: 53.30 €
Proteomanalysen zur Aufklärung regulatorischer Prozesse im Zentralstoffwechsel der humanen Produktionszelllinie AGE1.HN

Durch die wachsende Bedeutung der durch rekombinante, eukaryotische Zelllinien hergestellten Therapeutika besteht ein gestiegenes Interesse, die Vorgänge in den Zellen nachzuvollziehen und näher zu analysieren. Produktquantität und -qualität stehen dabei im Fokus des Interesses.

Die Kultivierung der AGE1.HN.PAR- und AGE1.HN.AAT-Zelllinien wurde im Rahmen dieser Arbeit zunächst etabliert und optimiert. Für den systembiologischen Ansatz im SysLogics-Projekt war ein Scale-up der Kultivierung bis zum 20 L-Edelstahlreaktor notwendig, da der gesamte Kulturverlauf mit allen zur Verfügung stehenden Omics-Techniken untersucht werden sollte.

Als (prozessübliche) physiologische Störungen wurden weiterhin Temperaturshifts zu niedrigeren Temperaturen (milde Hypothermie) eingesetzt, die direkte Auswirkungen z. B. auf viable Zelldichte und Substratkonzentrationen hatten.

Aus den generierten Proben wurden weiterhin die Mitochondrien isoliert, da in diesen Organellen ein Hauptbestandteil des Zentralstoffwechsels stattfindet, der Citratzyklus. Mittels 2D-DIGE Experimenten konnten Unterschiede in der Proteinexpression dargestellt werden, die mit der erstellten 2D-Proteomkarte für die mitochondriale Fraktion zugeordnet werden konnten.

Schließlich wurden die generierten Daten statistisch ausgewertet und zum Teil mit den aus den gleichen Prozessen berechneten Fluss-Daten korreliert. Es ergibt sich ein interessanter Blick auf regulierte und nicht-regulierte Stoffwechselwege der hier näher untersuchten Zelllinien.